Publication: In silico study, cloning and functional analysis of CjS8 protein from Campylobacter jejuni
cris.virtual.department | #PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE# | |
cris.virtual.orcid | #PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE# | |
cris.virtualsource.department | 2af2f484-15db-442f-83c5-979c31e1631d | |
cris.virtualsource.orcid | 2af2f484-15db-442f-83c5-979c31e1631d | |
dc.contributor.affiliation | #PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE# | en_US |
dc.contributor.author | Natto, Hatim Abdullah Yousef, | |
dc.contributor.supervisor | Ridhwan Abdul Wahab, Ph.D | en_US |
dc.contributor.supervisor | Mohd Zaki Salleh, Ph.D | en_US |
dc.contributor.supervisor | Robaiza Zakaria, Ph.D | en_US |
dc.date.accessioned | 2024-10-08T07:23:41Z | |
dc.date.available | 2024-10-08T07:23:41Z | |
dc.date.issued | 2020 | |
dc.description.abstract | In Gram-negative bacteria, protein secretion plays an important part in pathogenesis. Secretory proteins perform a variety of important role for bacterial survival in the environment and its involvement to cause disease to human. We have identified specific surface protein of Campylobacter jejuni. Genomic and protein analysis using bioinformatics tools on that protein reveals the presence of signal peptide at N-terminal of its peptide sequence, thus signifies this protein is highly potential acted as secreted protein. The size of the protein was calculated as 24.1 kDa. The availability of complete genome sequences of C. jejuni has allowed this study to make predictions about the composition of bacterial secreted protein that has good similarity in their sequence homology. The prediction of others C. jejuni secreted proteins were performed based on 24.1 kDa and several enterobacteriaceae pathogenic bacteria proteins sequences using a set of internet-based programs, including BLAST, ORF Finder and SignalP v 5. In silico analysis in this study identified the secreted protein of S8 family serine peptidase in C. jejuni genome and designated as CjS8. To investigate the involvement of CjS8 in the pathogenesis of C. jejuni infection, a C-terminal fragment of CjS8 was successful amplified, cloned and expressed using a TOPO expression vector. Rabbit polyclonal serum was raised against the purified recombinant CjS8 protein. The CjS8 null-mutant was constructed in C. jejuni by natural transformation and allelic exchange. PCR analysis and immunoblot of whole cell lysates with Ab_CjS8 (polyclonal antibody against CjS8) showed that CjS8 is naturally expressed in C. jejuni but not in the null mutant. In a strain survey on clinical isolates of C. jejuni, using the PCR and immunoblot analysis. Data showed that the CjS8 was presence in twenty out of twenty-three clinical isolates. Importantly, this study revealed the functional analysis results, that showed the CjS8 mutant was shown to affect the C. jejuni ability to adhere to the host cells (Caco-2 cells). Invasion was also affected by CjS8 mutant strain as well as the biofilm formation and motility. Thus, as a conclusion the CjS8 was the one, among a few secreted proteins described in C. jejuni and may represent a novel virulence factor. These results will be important in furthering our understanding of Campylobacter biology and pathogenesis. | en_US |
dc.description.abstractarabic | في البكتيريا سالبة الجرام ، يلعب إفراز البروتين دورًا مهمًا في التسبب في المرض. تؤدي البروتينات الإفرازية مجموعة متنوعة من الأدوار المهمة لبقاء البكتيريا في البيئة ومشاركتها في إحداث المرض للإنسان. لقد قمنا بتعريف بروتينًا سطحيًا محددًا للكامبيلوباكتر جيجوني. ان تحليل الجينوم والبروتين باستخدام أدوات المعلوماتية الحيوية على هذا البروتين يكشف عن وجود سيجنال ببتيد في الطرف ان من تسلسل الببتيد، وبالتالي يشير إلى أن هذا البروتين محتمل للغاية ان يعمل كبروتين مُفرز. لقد تم حساب حجم البروتين على أنه 24.1 كيلو دالتون.ان توفر التسلسل الجيني الكامل للكمبيالوباكترجيجوني اتاح لهذه الدراسة اجراء تنبؤات حول تكوين البروتينات البكترية المفرزة التي لها تشابه جيد في التجانس الجيني. تم اجراء التنبؤ بالبروتينات الاخرى غير الكامبيلوباكتر جيجوني التي يتم افرازها والتي لها تشابه جيد في التسلسل الجيني. تم اجراء التنبؤ بالبروتينات الأخرى التي يتم افرازها من الكامبيلوباكتر جيجوني استناداً الى 24.1 كيلودالتون والعديد من متواليات البكتريا المعوية المسببة للأمراض وذلك باستخدام مجموعة من البرامج المستندة الى الانترنت, بما في ذلك بلاست و اوبن ريدينج فريم وسيجنال بي. ان التحليل باستخدام السيلكو في هذه الدراسة حدد بروتين مفرز من عائلة اس 8 سيرين بيبتيديز في جينوم الكامبيلوباكتر جيجوني تم تسميته سي جيجوني اس 8. للكشف عن دور سي جيجوني اس 8 في التسبب بالمرض والاصابة بالعدوى بالكمبيلوباكتر جيجوني, تم بنجاح تكوين السي تيرمنل وزراعته وانتاج البروتين باستخدام تتوبو اكسبريشن فيكتور. تم انتاج مصل ارنب متعدد النسيلة ضد البروتين المنقى من سي جيجوني اس 8. تم انشاء الطفرة الجينية في السي جيجوني اس 8 بواسطة الانتقال الطبيعي والتبادل الأليلي. نتائج تفاعلات سلسلة البوليمريز والغشاء المناعي الناتج بتحليل كامل الخلايا مع الاجسام المضادة الناتجة ضد سي جيجوني اس 8, اظهرت أن سي جيجوني اس 8 ينتج طبيعياً في الكامبيلوباكتر جيجوني ولكن لاينتج في الطفرة الجينية فيها. في الدراسة الاستقصائية للسلالات على عينات طبية للكمبيلوباكتر باستخدام تفاعلات سلسلة البوليمريز وتحليل الغشاء المناعي الناتج بتحليل كامل الخلايا, اظهرت البيانات ان سي جيجوني اس 8 موجود في عشرون عزلة من اصل ثلاثة وعشرين عزلة طبية. ألاهم من ذلك كشفت هذه الدراسة عن نتائج التحليل الوظيفي حيث اوضحت أن هناك تأثير للسي جيجوني اس 8 الطفرة الوراثية على قدرة الكامبيلوباكتر جيجوني على الالتصاق بخلايا العائل المضيف. كذلك الغزو تأثر بالطفرة الوراثية للسي جيجوني اس 8 وكذلك الحال بالنسبة لكل من تشكيل الأغشية الحيوية والحركة. وهكذا فانه كاستنتاج فان السي جيجوني اس 8 يعتبر واحداً من بين عدد من البروتينات المفرزة الموصوفة في الكامبيلوباكتر جيجوني والذي يشكل عامل ضراوة جديد. سوف تكون هذه النتائج مهمة في تعزيز فهمنا لبيولوجيا الكامبيلوباكتر وطرق احداث المرض. | en_US |
dc.description.callnumber | t QR 82 Z9 N284I 2020 | en_US |
dc.description.identifier | Thesis : In silico study, cloning and functional analysis of CjS8 protein from Campylobacter jejuni /by Hatim Abdullah Yousef Natto | en_US |
dc.description.identity | t11100418162HatimAbdullahYousefNatto | en_US |
dc.description.kulliyah | Kulliyyah of Allied Health Sciences | en_US |
dc.description.notes | Thesis (Ph.D)--International Islamic University Malaysia, 2020. | en_US |
dc.description.physicaldescription | xx, 207 leaves : illustrations ; 30cm. | en_US |
dc.description.programme | Doctor of Philosophy | en_US |
dc.identifier.uri | https://studentrepo.iium.edu.my/handle/123456789/9112 | |
dc.language.iso | en | en_US |
dc.publisher | Kuantan, Pahang : Kulliyyah of Allied Health Sciences, International Islamic University Malaysia, 2020 | en_US |
dc.subject.lcsh | Campylobacter jejuni -- Research | en_US |
dc.subject.lcsh | Pathogenic bacteria -- Research | en_US |
dc.title | In silico study, cloning and functional analysis of CjS8 protein from Campylobacter jejuni | en_US |
dc.type | Doctoral Thesis | en_US |
dspace.entity.type | Publication | |
oairecerif.author.affiliation | #PLACEHOLDER_PARENT_METADATA_VALUE# |
Files
Original bundle
1 - 2 of 2
Loading...
- Name:
- t11100418162HatimAbdullahYousefNatto_24.pdf
- Size:
- 973.79 KB
- Format:
- Adobe Portable Document Format
- Description:
- 24 pages file
Loading...
- Name:
- t11100418162HatimAbdullahYousefNatto_SEC.pdf
- Size:
- 3.78 MB
- Format:
- Adobe Portable Document Format
- Description:
- Full text secured file
License bundle
1 - 1 of 1